Obecný

Polymerázová řetězová reakce (PCR)


Posloupnost PCR

Polymerázová řetězová reakce (PCR) je umělý proces pro amplifikaci DNA.
Praktické uplatnění nachází v testech otcovství, genetických otiscích prstů pro trestné činy nebo při odhalování nemocí (genetická onemocnění i virové infekce).
V takzvaném termocykleru je DNA, která má být amplifikována, spojena s volnými nukleotidy, DNA polymerázami a speciálními primery. Termocykler pak umožňuje automatickou sekvenci PCR, protože trvá několik cyklů, dokud není amplifikováno dostatečné množství DNA. Už jeden dvojitý řetězec DNA stačí k použití postupu. Počet duplexů DNA se potom exponenciálně zvyšuje za cyklus (1-2-4-8-16 atd.), Takže po 30–50 cyklech je k dispozici dostatek genetického materiálu. Avšak v polymerázové řetězové reakci nejsou amplifikovány žádné kompletní DNA duplexy, ale pouze předem určené řezy. Tyto sekce mohou být definovány velmi přesně pomocí uměle syntetizovaných primerů.
denaturaceDNA se zahřeje na asi 90 ° C, což rozpouští vodíkové vazby mezi komplementárními bázemi. Tím se DNA rozdělí na jednotlivé řetězce.
hybridizacePři asi 60 ° C se specifické primery nasedají na 3 'konce DNA s jednoduchými vlákny. Platí princip komplementarity: podle svých základů se primery mohou připojit pouze ke komplementárnímu protějšku (adenin s thyminem a cytosin s guaninem).
polymerizaceTeplota se zvýší na asi 70 ° C. DNA polymerázy začínají u primerů od 3 'do 5' připojením komplementárních bází (elongace). Nakonec byly vytvořeny dva jednořetězcové DNA, dva dvouřetězcové DNA.
Nyní, jak již bylo uvedeno, se tyto tři kroky opakují.