Informace

Co je test PCR?


Vím, že PCR se používá k amplifikaci DNA, ale co lidé myslí, když zmiňují „testy PCR“ pro diagnostiku onemocnění? A co znamená pozitivní/negativní test PCR?


Testy PCR by zahrnovaly amplifikaci DNA dříve, než proběhnou skutečné testy. Testy PCR ve skutečnosti odkazují na testy, ke kterým dochází po provedení PCR. Většinu času, když se podíváte na testy PCR, vidíte takové obrázky

To je výsledek gelové elektroforózy, a nikoli konkrétně PCR, protože PCR pouze zvyšuje obsah DNA, takže je dostačující pro gel např. proběhnout (pokud ne, nebudete si moci zobrazit pásma atd.).

Diagnostika genetických chorob je dostupná podobnými postupy (gel, např. Analýza RFLP). Jsou prostě kategoricky označovány pod PCR. Zjišťují přítomnost mutantních nebo zdravých alel a následně to, zda je subjekt testován pozitivní nebo záporný pro nemoc.


Rozdíl mezi rychlým a PCR testem COVID-19

Nebyli jsme tehdy připraveni, když se virus neznámého původu poprvé objevil v čínském Wu -chanu a za necelé dva měsíce se potýkal s více než 150 zeměmi, nakazil stovky tisíc lidí po celém světě a všude šířil paniku a chaos. V březnu 2020 vyhlásila WHO vypuknutí celosvětové pandemie a pojmenovala nový koronavirus jako virus COVID-19, který od té doby způsobuje chaos. Ano, nebyli jsme tenkrát připraveni, ale jsme připraveni nyní. V rané fázi epidemie se možnosti klinické léčby a diagnostika COVID-19 rychle měnily a byly matoucí. Lékařské a vědecké bratrstvo již pochopilo, že akumulace dat, porozumění COVID-19 a důležitost spolehlivých testů pro omezení šíření viru jsou stále zjevnější. Pokud jde o diagnostiku a detekci COVID-19, lze testování široce rozdělit do dvou kategorií: Rapid Antigen Test a PCR Test.


Co je test LAMP?

Smyčkově zprostředkovaná izotermická amplifikace (LAMP) pro testy COVID-19 začínají odběrem vzorků z nosu nebo hrdla pomocí tamponu. Vzorky lze také odebrat jinými způsoby, jako je hlen z těžkého kašle. Stejně jako technika PCR, jako je RT-PCR, je virová RNA ve vzorku nejprve převedena na DNA, což umožňuje její kopírování. LAMP reakce se provádí při konstantní teplotě (60 až 65 ° C).

Amplifikaci virové DNA zahrnující technologii LAMP a činidla lze detekovat, když se reakční směs zakalí v důsledku produkce „pyrofosfátu hořečnatého“. Tato oblačnost umožňuje snadnou diagnostiku COVID-19 vědci a klinickými lékaři. Přesnost výsledků testů lze zlepšit použitím speciálních fluorescenčních barviv nebo barviv měnících barvu v reakční směsi. Tato barviva interagují s virovou DNA a lze měřit intenzitu změny světla nebo barvy, aby se získal přibližně počet molekul virové RNA, který byl původně ve vzorku.


Test PCR na COVID-19 je klíčem k pandemickému podvodu

The polymerázová řetězová reakce Test (PCR) – používaný jako hlavní prostředek pro koronavirus – není vhodný pro daný účel. Zde shrnujeme diskreditované testování na COVID19 a vybízíme vás k vlastnímu výzkumu a lepší informovanosti o tom, jak nesprávné směrování, nekompetentnost a vědecké podvody vážně poškozují naši osobní a společenskou pohodu.

Nick Delgado napsal v dubnu vynikající úvod o tom, jak je tento test COVID19 široce používán (a zneužíván), a my zde uvádíme některé jeho analýzy. Navzdory tehdy známým problémům zůstává test PCR nejčastěji používaným testem COVID-19 v USA i na celém světě.

Test PCR vynalezla Kary Mullis (foto, nahoře) v roce 1985, ale nikdy nebyl určen k detekci nemocí, jeho primární aplikace zahrnovaly biomedicínský výzkum a kriminalistiku.

Před svou smrtí v roce 2019 řekl Mullis novinářům:

"Vědci dělají světu strašnou škodu ve jménu pomoci." Nevadí mi útočit na vlastní bratrstvo, protože se za to stydím. "Kary Mullis, vynálezce polymerázové řetězové reakce

Mullis často vystupoval proti používání svého testu k diagnostice nemocí. Takzvaní odborníci varování ignorovali. Nyní však přichází řada nezávislých vědců a lékařských profesionálů, aby odsoudili idiotství vlád, médií a nevládních organizací za tlačení počtu nových koronavirů “případů##8221 (nikoli úmrtí), založených na falešných výsledcích tohoto problematického testu PCR .

Zprávy o původním velkém průlomu inovace Mullis Polymerase Chain Reaction z roku 1980 a#8217 Londýnský pozorovatel napsal:

"Od té doby, co James Watt prošel Glasgow Green v roce 1765 a uvědomil si, že sekundární parní kondenzátor transformuje parní energii, inspiraci, která rozpoutala průmyslovou revoluci, má jedinou významnou myšlenku tak dobře zaznamenanou v čase a místě." ....

Kromě skvělého úvodního článku Delgado ’ doporučujeme přečíst si Allana Weisbeckera, který nabízí aktuálnější (16. srpna 2020) analýzu citující nedávné důkazy odhalující bludy kolem testování na COVID. [1]

Weisbecker si klade klíčovou otázku, kterou bychom si měli položit:

Co máme na mysli, když říkáme, že někdo má „pozitivní test“ na koronavirus?

Byli jsme uneseni našimi technologiemi, ale zůstali jsme negramotní o tom, co vlastně znamenají. V tomto případě jsem ve výjimečné situaci, kdy jsem věděl, trávil čas s ním a dělal s ním rozhovor s vynálezcem metody používané v současnosti dostupných testech na Covid-19, která se nazývá PCR, (polymerázová řetězová reakce.) ”

Mullis a další správně označili za pitomost skupinového myšlení – spoléhání se na špatně informované a scestné ‘ odborníky ’, kteří řídí vládní zdravotní politiku. Klíčovým viníkem mezi prominentními světovými orgány je Světová zdravotnická organizace (WHO), která hlasitě říká “test, test, test! ”

Vedoucí WHO Tedros Adhanom Ghebreyesus a jeho spoluspiklenci prosazující nový dystopický plán pro ‘Velký reset ’ dobře vědí, čím více testujete, tím více pozitivních případů se objeví a čím více jejich šílených reakcí na ‘ krizi &# 8217 bude validován. Odpůrci jsou ale k tomuto podvodu moudří. Zde je typický komentář jednoho z tisíců odborníků nesouhlasících s přijatým příběhem:

"Jsem skeptický, že test PCR je někdy pravdivý." Je to skvělý nástroj vědeckého výzkumu. Je to hrozný nástroj pro klinickou medicínu, “ varuje doktor David Rasnick, biochemik a vývojář proteáz.

Jak výzkum Delgado ’s zjistil:

“Test PCR je natolik známý, že poskytuje nepřesné výsledky, že CDC varuje, aby test nedával asymptomatickým osobám “kvůli zvýšené pravděpodobnosti falešně pozitivních výsledků."Ve skutečnosti existuje slavný čínský dokument, který uvádí, že pokud testujete asymptomatické lidi pomocí PCR, až 80% pozitivních výsledků může být falešně pozitivních."

Čísla však nejsou pouze zkreslena falešně pozitivními výsledky, ale jsou také zkreslena tím, kolik lidí nabízí test a v jakém stavu se nacházejí. Například během prvních týdnů byly testy „pandemie“ vzácné. S tím, jak se staly stále více dostupné, se samozřejmě zvýšil také počet infekcí, které byly způsobeny, a falešně pozitivní výsledky tyto počty ještě zvýšily. ”

Rozsáhlé spoléhání na PCR pro testování COVID19 je hloupé. Je to zločinné, protože je to tlačeno jako ospravedlnění pro zachování opatření ‘lockdown ’ a pro kombinaci strachu a bídy (včetně ekonomické), velká část světa stále trpí v důsledku tohoto obrovského vědeckého podvodu.

Abychom lépe ocenili šílenství, které nás potkalo, pojďme si trochu zopakovat historii testu PCR, abychom zjistili, jak jsme se ponořili do této nesmyslné nevědecké morálky. Kanadský výzkumník David Crowe, vystudoval biologii a matematiku, hostitel Infekční mýtus podcast to řekl o šílenství testování:

"První věc, kterou je třeba vědět, je, že test není binární." Ve skutečnosti si myslím, že neexistují žádné testy na infekční onemocnění, které by byly pozitivní nebo negativní.

Na začátku devadesátých let se začala používat PCR (polymerázová řetězová reakce) a Kary Mullis za ni v roce 1993 získal Nobelovu cenu. PCR, zjednodušeně řečeno, je metoda tepelného cyklování používaná k vytvoření až miliard kopií konkrétní vzorek DNA, takže je dostatečně velký na studium. Jak je správně uvedeno na stránce Wikipedie PCR, PCR je „... nepostradatelná technika“ s „širokou škálou“ aplikací, „... včetně biomedicínského výzkum a kriminalistická kriminalistika. “ [Italics mine.] Stránka dále říká mému [Mullisovi, vynálezci testu], že jedna z aplikací PCR je „... pro diagnostiku infekčních chorob“.

"První věc, kterou je třeba vědět, je, že test není binární," řekl. "Ve skutečnosti si myslím, že neexistují žádné testy na infekční onemocnění, které by byly pozitivní nebo negativní." Dělají to tak, že berou nějaké kontinuum a libovolně říkají, že tento bod je rozdílem mezi pozitivním a negativním.”[Zvýraznění přidáno]

"To je tak důležité." Myslím, že si to lidé představují jako jednu ze dvou věcí: pozitivní nebo negativní, jako těhotenský test. „Máte“ nebo nemáte. ”

"PCR je opravdu výrobní technika," vysvětlil Crowe. "Začni jednou molekulou." Začnete s malým množstvím DNA a v každém cyklu se množství zdvojnásobí, což nezní tak moc, ale pokud zdvojnásobíte 30krát, získáte přibližně miliardukrát více materiálu, než jste začali. Takže jako výrobní technologie je to skvělé ... Tady to začíná být divoké.

"V jednom dokumentu," říká Crowe, "jsem našel 37 cyklů. Pokud jste nezískali dostatečnou fluorescenci ve 37 cyklech, jste považováni za negativní. V jiném, papíru, byla mezní hodnota 36. Třicet sedm až 40 bylo považováno za „neurčité“. A pokud jste se dostali do tohoto rozsahu, udělali jste další testování. Viděl jsem pouze dva dokumenty, které popisovaly, jaký je limit. Je tedy docela možné, že různé nemocnice, různé státy, Kanada versus USA, Itálie versus Francie používají různé standardy citlivosti mezní hodnoty testu Covid. Pokud byste tedy ve 20 skončili, všichni by byli negativní. Pokud odříznete padesátku, můžete mít všechny pozitivní. “”

Faktem je, že drtivá většina lidí infikovaných COVID-19 má mírné příznaky a odhaduje se, že 50% infikovaných lidí je asymptomatických.

Mnoho lidí, kteří údajně zemřeli na COVID-19, už bylo velmi nemocných a stejně by v krátké době zemřeli. Vědecká data zpřístupněná veřejnosti dokazují, že přibližně 95 procent úmrtí byli pacienti starší 80 let se dvěma nebo více komorbiditami (jako je rakovina).

Sociální média, hlavní vědecké časopisy (ve vlastnictví samoobslužných korporací) a neobjektivní národní tisk, který vydělává peníze prodejem špatných zpráv, jsou velmi důležité pro zajištění toho, že já a já nebudeme moci vidět důkazy, které jsou v rozporu s přijatými ‘ zánik a šero ’ příběh pandemie.

PubMed potichu stáhl důležitý čínský výzkumný dokument, který odhalil, že přibližně 80 procent pozitivních testů PCR může být falešně pozitivních. Ačkoli pouze abstrakt je stále online, i když se zdá, že čínský papír je stále publikován a je k dispozici.

Je zajímavé, že o měsíc později článek publikovaný v časopise Journal of Medical Virology ukázal, že 29 ze 610 pacientů v nemocnici ve Wu -chanu mělo 3 až 6 výsledků testů, které se převrátily mezi „Negativní“, „pozitivní“ a „pochybné“.

“ Vlastně mám překlad s přítelem. Přeložil jsem to do angličtiny a je to opravdu standardní výpočet toho, čemu říkají pozitivní prediktivní hodnota. Abstrakt v podstatě řekl, že v asymptomatických populacích pravděpodobnost pozitivního testu na koronavirus je jen asi 20%. 80% bude falešně pozitivních. ”

PCR pro diagnostiku je velký problém, když se musíte uchýlit k mnohonásobnému zesílení výsledku –, což zvyšuje pravděpodobnost generování velkého množství falešných poplachů.

Spojené státy, Velká Británie a další významní státní příslušníci se téměř vzdali klasické diagnostické medicíny ve prospěch biotechnologie nebo laboratorní medicíny. Lékaři již fyzicky nevyšetřují pacienty a neurčují jednoduchou infekci dýchacích cest, jako je nachlazení nebo chřipka.

Místo toho kvůli převládajícím obavám skočí ze zbraně, aby převzali “covid ” protože symptomy jsou téměř identické. Jako vodítko si zkontrolujte oficiální záznamy a zjistěte, jak málo lidí je klasifikováno jako nemocných z těchto tradičních onemocnění. ‘Čau presto‘ téměř každá infekce hrudníku je nyní certifikována jako pravděpodobná kvůli novému koronaviru.

Test PCR zjišťuje tolik asymptomatických případů (lidé, kteří jsou pozitivní, ale jinak jsou velmi zdraví, bez příznaků), protože technika replikace, na kterou se spoléhá, ​​je navržena tak, aby našla mikroskopické fragmenty a zesílila je tak, aby vypadaly mnohem hůře, než jsou.

Test PCR téměř ve všech případech zjišťuje drobné fragmenty nukleových kyselin. V tomto bodě zvažte e -mail od Kary Mullisové, vdově po boxerovi Tommym Morrisonovi, jehož kariéra a život byly zničeny „testem na HIV“ a který se roky tvrdě soudil proti výrobcům testů, napsal Dr. Mullis, 7. května 2013:

"PCR detekuje velmi malý segment nukleové kyseliny, která je součástí samotného viru." Detekovaný specifický fragment je určen poněkud libovolnou volbou použitých primerů DNA, které se stanou konci amplifikovaného fragmentu. "

Fragmenty tak mikroskopicky malé, že neexistuje žádná možnost, že by kterémukoli zdravému člověku hrozilo nebezpečí úplné infekce. Laboratoře a poté tvůrci politik jsou tak mikroskopicky malé, přesto jsou označovány jako ‘pozitivy. ’

Ale při jakékoli racionální a rozumné interpretaci na ně nelze spoléhat jako na důkaz někoho nemocného. Jsou to lidé, jejichž testy se objevují tak nekonečně malé, ale jsou ‘pozitivní ’ spouštěčem, i když nemusí být ničím jiným než pozůstatky bezvýznamné rýmy, kterou měli týdny nebo měsíce dříve.

Dalším příkladem šílenství je studie ze Singapuru, ve které byly testy prováděny téměř denně na 18 pacientech. Většina přešla z „pozitivního“ na „negativní“ zpět na „pozitivní“ alespoň jednou a až pětkrát u jednoho pacienta.

Dokonce i Wang Chen, prezident Čínské akademie lékařských věd, v únoru připustil, že testy PCR jsou „pouze 30 až 50 procent přesné“, zatímco Sin Hang Lee z laboratoře Milford Molecular Diagnostics poslal dopis týmu WHO pro reakci na koronavirus a 22. března 2020 Anthonymu Faucimu se slovy, že:

"Bylo široce hlášeno, že testovací soupravy RT-qPCR [reverzní transkriptázová kvantitativní PCR] používané k detekci RNA SARSCoV-2 v lidských vzorcích generují mnoho falešně pozitivních výsledků a nejsou dostatečně citlivé na detekci některých skutečně pozitivních případů."

Také hlavní lékařský časopis Deutsches Ärzteblatt uvádí, že v Německu 70 procent lidí testovaných „pozitivně“ není „pozitivních“ vůbec. Přesto „je jim předepsána karanténa“.

Není to to, co si lidé představují, řekněme pro těhotenský test, kde máte definovatelnou pozitivní nebo negativní indikaci plodu (nebo ne). Nepokračujte v posilování výsledků negativního těhotenského testu, dokud nezískáte ‘pozitivní ’ pro dítě. Je to šílené. Ale to se děje (a prochází muster) v testech PCR na koronavirus.

Jak vysvětlil Crowe, laboratoř by si mohla myslet, že bude dále zesilovat sekvenci testování vzorku DOKUD dosáhnou bodu, ve kterém se libovolně rozhodnou, že mají dostatek kopií svého vzorku k deklaraci pozitivního výsledku na COVID19. Laboratoře jsou tak motivovány k zesílení vzorků a nalezení dalších případů covidů – “jen pro jistotu! ” Je to začarovaný kruh hlouposti, která řídí strach.

Ne ‘Gold Standard ’ Proto není žádné testování přesné

V každém případě tyto testy nebyly postaveny na „zlatém standardu“, což znamená čištění skutečného viru. Purifikace znamená, že patogen byl oddělen od všeho ostatního. Spoluobjevitel HIV a laureát Nobelovy ceny Luc Montagnier novinářovi Djamelovi Tahimu v rozhovoru skvěle řekl: „Opakuji, nečistili jsme.“

Jessica C. Watson z Bristolské univerzity to potvrzuje. Ve svém příspěvku „Interpretace výsledku testu na COVID-19“, který byl nedávno publikován v The British Medical Journal, píše, že existuje „nedostatek tak jasného „zlatého standardu“ pro testování na COVID-19.

Toto přiznání nám také učinil Thomas Löscher, bývalý vedoucí oddělení infekce a tropické medicíny na univerzitě v Mnichově a člen Spolkové asociace německých internistů. [2]

David Crowe to vysvětluje dále:

“PCR je skutečně výrobní technika. Začnete jednou molekulou. Začnete s malým množstvím DNA a v každém cyklu se množství zdvojnásobí, což nezní tak moc, ale pokud zdvojnásobíte 30krát, získáte přibližně miliardukrát více materiálu, než jste začali. Takže jako výrobní technologie je to skvělé. Dělají to, že při výrobě fluorescenční molekuly připojují k RNA.

Svítíte světlem na jednu vlnovou délku a dostanete odpověď, světlo se vám vrátí zpět na jinou vlnovou délku. Měří tedy množství světla, které se vrací, a to je jejich náhrada za množství DNA. Používám slovo DNA. V testu RT-PCR je krok, ve kterém převedete RNA na DNA. Test PCR ve skutečnosti nepoužívá virovou RNA. Používá DNA, ale je to jako bezplatná RNA. Logicky je to totéž, ale může to být matoucí. Jako proč najednou mluvím o DNA? V zásadě existuje určitý počet cyklů. “ [3]

V rozhovoru pro Principia Scientific International o šokující absenci jakéhokoli takového “gold standard ” mezinárodně uznávaného odborníka na testování virů, Dr. Saeed Qureshi řekl, že neví o žádném takovém “gold standardu##8221 pro test virů. Řekl, že je to proto, že žádná laboratoř dosud uspokojivě identifikovala, izolovala a replikovala odlišný a nový virus – COVID19.

Problémem falešných poplachů jsou ale systémové chyby a možná potenciální padělky, které se teprve odhalují.

Politika Big League Politics informovala o rozsáhlých chybách pocházejících z určitých testovacích zařízení COVID-19, přičemž celkový počet případů je značně přehnaný.

“ Floridské ministerstvo zdravotnictví se potácí poté, co byl odhalen podvod v tom, jak byly v celém státě hlášeny míry testování na COVID-19.

Poté, co ministerstvo zdravotnictví vydalo zprávu ukazující ohromující celostátní míru pozitivity 11 procent, analýza čísel odhalila závažné nesrovnalosti. Mnoho laboratoří hlásilo 100 procent pozitivity, což znamená, že každý test byl pozitivní.

Kromě laboratoří hlásících 100 procent pozitivity existovala další testovací zařízení, která hlásila abnormální úrovně pozitivních testů. FOX 35 zjistil, že Centra Care uvedla, že 83 lidí, kteří předložili testy, bylo počítáno jako pozitivní. Lékařské centrum Orlando Veteran’s Affairs Center hlásilo 76 procent pozitivity, NCF Diagnostics hlásilo testy s 88 procenty pozitivity a Orlando Health hlásilo 98 procent pozitivity.

Orlando Health připustil, že výsledky zprávy ministerstva zdravotnictví jsou pochybné. Řekli, že jejich míra pozitivity byla pouze 9,4 procenta, ne 98 procent, jak se ukázalo ve zprávě. To vyvolává velké pochybnosti ohledně přesnosti celkových případů, které byly hlášeny na Floridě.

Falešné zprávy použily Floridu jako příklad k posílení jejich masové hysterie COVID-19 kvůli všem domnělým případům, které se objevovaly po celém státě. ”

Oceněný novinář Torsten Engelbrecht uvádí více podrobností ve svém článku ‘COVID19 PCR testy jsou vědecky nesmyslné. ’ [4]

Ke skepsi se přidávají patologové, kteří dosud nenašli jedinou pitvu ukazující na COVID19, jak je uvedeno v článku Off-Guardian z 27. června. [5]

Pravdou je, že viry jsou zřídka smrtící. Většina úmrtí souvisejících s koronaviry u lidí je způsobena DALŠÍMI chronickými chorobami, které brání imunitnímu systému nebo způsobují jeho rozpad v reakci na virus (cytokinová bouře), a nikoli poškození způsobené samotným virem.

Musíme přestat říkat „zůstaňte v bezpečí!“ všem. Jsme v bezpečí. Máme silný a inteligentní imunitní systém, který je navržen tak, aby neustále odolával toxickému a mikrobiálnímu zaplavení.

Pandemická nouze musí okamžitě přestat a svět se už nikdy nesmí uchýlit ke kolenní reakci na ‘krízi ’, ke které ve skutečnosti dochází každý rok v jakékoli normální chřipkové sezóně. Víme, že toto konkrétní ohnisko není horší než špatná chřipka, protože ‘ ani USA, ani Spojené království nemají ŽÁDNÉ nadměrné úmrtí na COVID19. ’

CDC dokonce tiše aktualizovalo pouze 6%

Viru je přímo přičítáno 180 000 úmrtí v USA na „virus“. [6]. Zatímco britský matematik, analýza oficiálních údajů Andrewa Mahera jde ještě dále. Došel k závěru, že NIKDY nezemřel na COVID19. [7]

Musíme přestat být ovcemi a začít znovu žít svůj život. Společně se odmítáme vzdát strachu.

[2] E-mail od prof. Thomase Löschera ze 6. března 2020

O autorovi: John O ’Sullivan John je generální ředitel a spoluzakladatel (s Dr. Timem Ballem) společnosti Principia Scientific International (PSI). John je zkušený vědecký spisovatel a právní analytik, který pomáhal doktorovi Ballovi porazit předního světového odborníka na klima Michaela „hokejku“ Manna v „vědeckém procesu století“. O'Sullivan je považován za vizionáře, který v roce 2010 vytvořil původní skupinu vědců „Zabijáci“, kteří poté spolupracovali na vytvoření prvního celovečerního odhalení teorie skleníkových plynů na světě a jejich nové návazné knihy.

PRINCIPIA SCIENTIFIC INTERNATIONAL, legálně registrovaná ve Velké Británii jako společnost začleněny pro charitativní účely. Sídlo: 27 Old Gloucester Street, London WC1N 3AX.


Reagencie a enzymy PCR

Získejte informace o historii PCR, úvahách o nastavení, důležitosti výběru DNA polymerázy, běžných metodách a aplikacích a odstraňování problémů.


Proč bychom tedy měli zpochybňovat PCR?

PCR pracuje s cykly. Pro každý cyklus se DNA nebo RNA zahřeje, což je to, co rozděluje vlákno. Tepelně odolná polymeráza se používá k přeměně rozděleného vlákna na dvě kopie nebo originál, po kterém se cyklus opakuje.

Toto je exponenciální zesílení. Z jednoho se stanou dva, z něj se stanou čtyři, osm atd. To je velmi užitečné, pokud se pokoušíte nashromáždit dostatek vzorku k provedení nejrůznějších testů a studií. Dokonce i s jediným vláknem DNA nebo RNA, po pouhých 30 cyklech, můžete mít 536 870 911 kopií.

Posuňte tento počet cyklů až na 40 a skončíte s celkem 549 755 813 888 z jednoho vlákna.

Na rozdíl od toho, čemu věří mnoho lidí, viry sídlí v každém z nás. Prostřednictvím našeho imunitního systému dochází k neustálému čištění našeho těla. Z jediného viru vám není špatně. Jakmile je detekován patogen, je vyslán signál a náš imunitní systém je uveden do činnosti. (7) (8)


Rozdíl mezi sérologickým testem a PCR

Základy

- Co je tedy sérologické testování? Sérologie je v podstatě vědecká studie séra nebo plazmy, zejména v reakci na reakci imunitního systému těla. Sérologický test je diagnostika infekčních chorob pomocí nebo detekce sérových globulinů, známých jako protilátky. Pomáhá zjistit, zda byl jedinec vystaven viru. Polymerázová řetězová reakce nebo PCR je jednou z nejčastěji používaných metod v molekulární diagnostice, která určuje, zda má pacient aktivní infekci. Poskytuje čistý obraz o klinickém stavu pacienta s ohledem na virus.

Testování

- Sérologický test je diagnostický test, který detekuje imunologickou odpověď specifickou pro infekční agens v séru jednotlivce. Hledá potenciální stopy patogenů ve vzorku krve člověka, aby určil, zda tato osoba byla či nebyla vystavena viru. Pomáhá určit, zda si člověk vyvinul imunitní odpověď na virus a může se bezpečně vrátit do normálního života. PCR, na druhé straně, je molekulární test, který zesiluje specifický fragment DNA za účelem zvýšení cílové DNA na detekovatelné úrovně. Hledá přímo genetický materiál viru v nosním nebo hrdlovém tamponu místo krve.

Postup

- Sérologický test je jednoduchý postup, který vyžaduje vložení vzorku krve k testování do zařízení pro testování protilátek. Hledá protilátky proti virům v krevním oběhu. V zařízení se protilátky vážou na antigen, zatímco ostatní protilátky se na antigeny neváží nebo se váží slabě, protože nejsou vyškoleni k útoku na tento specifický virus. Zařízení poté smyje slabě navázané antigeny a vyhledá zbývající protilátky, které jsou specifické pro virovou infekci. Pokud je přístroj detekuje, pak určí, že jsou protilátky přítomny v krevním oběhu.

PCR v zásadě vydělává miliony až miliardy kopií konkrétního segmentu DNA. Skládá se ze tří kroků - první krok je „denaturace“, která zahrnuje oddělení dvou řetězců vzorku DNA od sebe, druhý krok je „žíhání“, které určuje oblast DNA, která bude kopírována, a poslední krok je „ rozšíření “, které kopíruje DNA.

Sérologický test vs. PCR: srovnávací tabulka


K čemu slouží test PCR? Šest aplikací PCR

/>

PCR je zkratka pro polymerázovou řetězovou reakci. PCR je technologie molekulárního diagnostického testování, která existuje již dlouhou dobu a používá se k detekci nebo zacílení genetické sekvence DNA nebo RNA (např. V bakteriích, virech nebo dokonce ve výzkumu zvířat a rostlin) ve vzorku. PCR je cenný, ale přímočarý vědecký objev a každý nadšenec biologie o něm slyšel. Pro ty, kteří to nemají, máte štěstí, protože společnost Modern Biology Inc vám stojí za zády.

Co je test PCR?

Jednoduše řečeno, PCR je technika pro studium zvětšeného vzorku DNA amplifikovaného do milionů kopií ze specifické sekvence DNA. Je to zásadní krok v molekulární biologii a genetice.

Termín „řetězová reakce“ obvykle označuje 40násobné zesílení nebo fotokopírování množství DNA ve vzorku, což trvá 40 až 85 minut. Pokud je přítomno jedno vlákno cílené DNA a každé vlákno má fotokopii v každém ze 40 cyklů PCR, jedno vlákno DNA by mělo na konci PCR poskytnout více než 1 bilion kopií (za předpokladu 100% účinné reakce (= 240). Právě to dává PCR neuvěřitelnou citlivost.

Základy všech testů PCR jsou stejné bez ohledu na vzorek DNA. K nastavení PCR budete potřebovat pět základních „přísad“:

  • Vzorek DNA, který má být amplifikován.
  • Primery jsou krátké segmenty DNA, které zahajují proces PCR, a cílem je vázat se na obě strany segmentu DNA, který chcete duplikovat.
  • Nukleotidové báze v DNA (také známé jako dNTP), které vytvářejí bloky DNA (A, C, G a T), musí tvořit nové vlákno DNA.
  • K dokončení nastavení základen DNA přidáte enzym Taq polymerázy.
  • K zajištění toho, aby reakce probíhala za nejlepších možných podmínek, se používá pufr.

Pro real-time PCR je vyžadován termocykler s optickým systémem pro sběr fluorescence a počítač se softwarem schopným zaznamenávat data a provádět konečnou analýzu reakce. Proces PCR zahrnuje následující procesy:

  • Denaturace: V této fázi musí být dvě vlákna dvojité šroubovice DNA rozdělena, podobně jako replikace DNA. Vodíkové vazby spojující komplementární řetězce DNA se rozpadají, když teplota směsi stoupá, což způsobuje oddělení. Denaturace je termín pro tento postup.
  • Žíhání: Primery se vážou na cílové sekvence DNA a zahájí polymerační proces. K tomu může dojít pouze po snížení teploty roztoku. Každý pramen váže jeden primer.
  • Rozšíření: Původní vlákna DNA se používají jako šablony pro vytváření nových řetězců DNA. Volné nukleotidy DNA jsou spojeny dohromady enzymem DNA polymerázy.

Jeden cyklus PCR produkuje dvě dvouřetězcové cílové sekvence DNA, každou s jedním čerstvě syntetizovaným vláknem a jedním původním vláknem. Protože většina technik PCR vyžaduje značné množství DNA, cyklus se provádí několikrát (obvykle 20–30). Získání milionů kopií trvá přibližně 2–3 hodiny.

K čemu slouží test PCR?

PCR nabízí kromě základního výzkumu širokou škálu aplikací, včetně lékařské diagnostiky, kriminalistiky a zemědělství. Níže jsou uvedeny některé příklady použití PCR, které způsobují revoluci ve světě a ovlivňují naše životní perspektivy:

Genový výraz

PCR se často používá ke zkoumání variací v genové expresi napříč typy buněk, orgány a druhy v daném čase. Messenger RNA (mRNA) je v tomto procesu reverzně transkribována do komplementární DNA, která vyžaduje extrakci RNA ze sledovaných vzorků (cDNA). Množství cDNA produkované v PCR pak může určit původní množství mRNA. Reverzní transkripce PCR nebo RT-PCR je jiný název pro tento postup.

Detekci sekvenčních změn v alelách ve specifických buňkách nebo organismech lze provést genotypizací PCR. Genotypizace transgenních druhů, jako jsou knock-out a knock-in myši, je jedním příkladem. Sady primerů jsou navrženy tak, aby lemovaly zájmové oblasti a analyzovaly genetické varianty na základě existence nebo nepřítomnosti amplikonu a délky amplikonu. Je to pro detekci mutací vyskytujících se u rakoviny.

V procesu známém jako klonování PCR se PCR běžně používá ke klonování požadovaných segmentů DNA. Přímé klonování PCR zahrnuje amplifikaci a inzerci požadovaného úseku zdroje DNA (např. GDNA, cDNA, plazmidové DNA) do specificky navržených vhodných vektorů. Mohly by být také vytvořeny primery s extra nukleotidy na 5 'konci, což umožní větší modifikaci před vložením. Tyto přídavné sekvence zahrnují restrikční místa pro klonování sekvencemi kompatibilními s vektorem pro klonování nezávislé na ligaci, restrikční štěpení a ligaci a rekombinační sekvence pro sestavení více fragmentů.

Mutageneze

Mutageneze je jednou z výhod klonování PCR, protože vám umožňuje klonovat požadované mutace do požadovaného genu pro zkoumání mutageneze. Pokud jde o místně řízenou mutagenezi, design primerů PCR integruje změny báze, delece nebo inzerce v rámci určené sekvence. Primery se zaměřují na sekvenci, která již byla klonována v plazmidu. PCR produkt s vloženou mutací je pak sám ligován za vzniku kruhového plazmidu, transformujícího kompetentní buňky.

Methylace

PCR se používá k prozkoumání methylace specifické pro lokus a vyvíjejí se dva páry primerů k rozlišení stavu methylace požadovaného lokusu v procesu zvaném methylation-specific PCR (MSP).

PCR je přímá metoda obohacování templátové DNA pro sekvenování. To maintain DNA sequence accuracy, high-fidelity PCR is recommended for the creation of sequencing templates. PCR-amplified fragments are purified and submitted to the sequencing processes. PCR primers can be tagged at their 5′ ends with a commonly used binding site for sequencing primers such as M13 or T7 “universal primer” binding site, to facilitate the sequencing process.

PCR is commonly used to build DNA sequencing libraries in next-generation sequencing (NGS). DNA samples are enhanced by PCR (when the initial quantity is restricted), and tags are added to NGS libraries. PCR-based technologies are employed every day in clinical diagnostics, criminal investigations, and agricultural biotechnology, in addition to basic research. These applications necessitate consistent performance, high sensitivity, and adherence to strict specifications.

As a result, heat cyclers and reagents must meet these requirements and be built for them. Genetic testing, the detection of oncogenic mutations, and infectious disease testing are all examples of molecular diagnostics. Human identification by PCR in forensics relies on amplifying distinctive short tandem repeats on gDNA to distinguish individuals.


Principles and Applications of PCR Technology

As a biochemical technology, polymerase chain reaction (PCR) is widely used for varied applications across the field of molecular biology. PCR technology, as it is popularly known, was developed in the year 1983 and since then till now, it has proved to be an indispensable technique used for numerous medical and biological applications. The article will thoroughly define what PCR technology is and what its varied applications are.

PCR is a biochemical technology that is widely used in the field of molecular biology for amplification of a single or few replicas of a piece of DNA across numerous structures of significance. The technology hence helps to produce innumerable copies of a specific DNA sequence and is used in medical and biological research labs for various applications. The contribution of PCR technology in the realm of DNA and gene related studies, analysis of diseases, and other diagnostic assessments are immense.

How PCR Technology Works?

The process of PCR technology requires unraveling the DNA structure and to form enzymatic replication of the same, and this is achieved with the help of thermal cycling. It is a method of repetitive heating and cooling of the reaction to bring out desired results out of the DNA sequence. This selective and repeated amplification is facilitated by short DNA fragments (primers) and a DNA polymerase. The copy of DNA generated as the PCR progresses, acts like a template for further replication of DNA sequence. It sets a chain reaction in motion, with an ascending amplification of DNA template. PCR technology is widely used and modified to execute a wide array of genetic manipulations.

What are the applications of PCR technology in varied fields?

PCR technology is extensively used in numerous applications, some of which are mentioned below:

Medical Applications

  1. The most common medical application of PCR is for genetic testing where a DNA sample is analyzed for the presence of genetic disease mutations.
  2. Prospective parents who act as genetic carriers are tested against the presence of any disease-causing genes by using PCR technique.
  3. The technique has proved to be useful for pre-implantation genetic diagnosis where a developing embryo s cells are tested against any mutations.
  4. PCR is equally helpful for a sensitive test for tissue typing that is crucial to organ transplantation.

Infectious Disease Application

PCR technology has revolutionized the way infectious disease organisms are characterized and detected in human body, which in turn has helped medical sciences to provide immediate solution for a specific infection. PCR helps in varied applications dealing with infectious diseases through means like: detecting infections earlier, screening the donated blood directly for the virus, testing of the newborns against any existing virus and immediate quantifying of the effects of any therapy. PCR technique facilitates detailed genetic analysis to detect any resistance to antibiotic or other therapeutic methods, so that immediate and effective medical remedy can be provided against any infection. Besides, PCR technology is also capable of monitoring the spread of any infectious disease through an infected domestic or wild animal so that necessary control measures can be taken on time.

Forensic Applications

PCR technology has proved to be equally crucial in forensic applications like genetic fingerprinting done with the help of extraction of minute DNA samples from the crime scene. This has greatly helped the judicial system of a country in identifying the criminal from suspects. A DNA database of earlier convicts or evidence helps in the process. PCR technology-based DNA fingerprinting is also used in cases where parental testing is required. The same process is also used to confirm the blood or genetic relationship between a concerned child and his biological parents.

Apart from these, PCR technology is highly important in conducting research studies in the field of molecular genetics. Some of the research applications facilitated by this technique are hybridization probes, DNA cloning, gene expression, phylogenic analysis, sequence-tagged sites, genetic mapping and DNA sequencing. Recently human genome was completely sequenced opening the door for identifying hundreds of targets for therapeutic intervention for diseases such as cancer, diabetes, arthritis etc. PCR technology was very instrumental in this major milestone in biological research.


Podívejte se na video: Dès le 15 octobre, les non-vaccinés devront payer pour les tests PCR et antigéniques (Listopad 2021).